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白細(xì)胞介素-2（interleukin-2;IL-2 ）

發(fā)布時間：2014/2/14 15:16:52　瀏覽次數(shù)：10029　[字號：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁　打印此頁]

其他名稱：T細(xì)胞生長因子(T cell growth factor,TCRF) 

定義：主要由活化的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子。是所有T細(xì)胞亞群的生長因子，并可促進(jìn)活化B細(xì)胞增殖，故為調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子，也參與抗體反應(yīng)、造血和腫瘤監(jiān)視。 

【中文名稱】： 白細(xì)胞介素-2 

【簡寫拼音】： BXBJS-2 

【英文名稱】： Interleukin-2 

【所屬類別】： 免疫增強(qiáng)劑||其他抗腫瘤藥及輔助治療藥 

【別名】 白間素, 欣吉爾, T細(xì)胞生長因子 ,白細(xì)胞介素-2 

【外文名】Interleukin-2 ,IL-2 

【適應(yīng)癥】 白介素－2是一個分子量為14500的糖蛋白，它刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動的T細(xì)胞增殖。重組白介素－2可用于臨床研究。主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Rossenberg）。LAK細(xì)胞代表1個有單核巨噬細(xì)胞，B和T淋巴細(xì)胞特征的異原的細(xì)胞體。這些LAK細(xì)胞似乎對癌細(xì)胞有特異作用。此外，LAK細(xì)胞（不象T細(xì)胞）介導(dǎo)殺傷不受MHC的約束。[1] 

1 材料和方法：

　　1.1 制備粗制IL-2無菌采血，肝素抗凝，用RPMI1640按1∶1將血液稀釋，然后重層于菲可液面上，以1 500r/min離心30min，取白細(xì)胞層，用RPMI1640洗2次，按1～3×10細(xì)胞/ml濃度加入10%胎牛血清RPMI1640，注入一裝有磁棒的大瓶中，置37℃攪拌培養(yǎng)4天，取出，分裝于50ml離心管中，1 500r/min離心20min，棄上清液，將細(xì)胞懸浮于1%胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液中，使細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/ml。同時加入純質(zhì)PHA1～2μg/ml以及多種B淋巴母細(xì)胞株，使其濃度為106細(xì)胞/ml，37℃攪拌培養(yǎng)18～24h后，取出以1500r/min離心30min，取上清，用045μg濾膜過濾除菌，濾液即為粗制IL-2。 

　2 制備精品IL2 

　　2.1 硫酸銨沉淀與真空濃縮透析：在4℃下將硫酸銨粉末按50%飽和量加入上述粗制IL-2中，攪拌2h，12000g離心30min，取上清液，再加入80%飽和硫酸銨，4℃過夜，次日以12000g離心30min，棄上清液，將沉淀溶于1% PEG 6 000的1∶2 PBS溶液(pH值73)中，置真空負(fù)壓濃縮透析器中透析濃縮至所需容量。 

　　2.2 Sephadex G100凝膠過濾：用2×180cm的過濾柱及PBS(同上)，以80ml/h流速過濾。將各管洗脫液用紫外分光光度計(jì)280nm檢測其OD值。同時將幾種不同分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白也用相同條件過濾及檢測其OD值，繪出IL-2及標(biāo)準(zhǔn)蛋白OD值的曲線。將各管洗脫液過濾除菌后，作白細(xì)胞生物活性試驗(yàn)，按試驗(yàn)結(jié)果繪出曲線，找出具有最高IL2活性的幾管洗脫液，混合后，作下一步精制。 

　　2.3 BlueSepharose層析：將上述混合后的洗脫液加入BlueSepharose柱中，流速約15ml/h，按每管10ml收集流出液，當(dāng)樣品全部流出柱中以后，用上述PBS洗滌樣品柱，再用梯度NaCl溶液(從0075mol/L至06mol/L NaCl的PBS溶液)洗脫，按2ml/管收集洗脫液。NaCl 溶液梯度及流速均由梯度混合器調(diào)節(jié)控制。洗脫完畢后，作各管OD值及NaCl濃度的測定。各管洗脫液過濾除菌后，作出生物活性測定。將峰值前后的數(shù)管洗脫液混合，即為精制的IL2。置－20℃冰箱保存。 

　　3 檢定 

　　3.1 活性測定用10%胎牛血清RPMI1640將上述IL2稀釋為50%、25%、125%、625%，而后再將每個百分濃度以及100%濃度的IL2倍比稀釋，自1∶2至1∶128，將每個稀釋度分別加入多孔板的孔中，每孔01ml。然后取CT6細(xì)胞株(小鼠的IL2依賴性T細(xì)胞株)，調(diào)整濃度為106細(xì)胞/ml，每孔加入01ml，同時用培養(yǎng)基代替IL2作對照。將多孔板培養(yǎng)24h后，取出按每孔1μci的濃度加H3標(biāo)記胸腺嘧啶核苷繼續(xù)培養(yǎng)4h。取出后用MESHⅡ細(xì)胞收集器過濾洗滌細(xì)胞，用β計(jì)數(shù)器測定各孔細(xì)胞的cpm。必要時按此結(jié)果繪出曲線，確定活性單位。 

　　3.2 蛋白含量測定采用分光光度計(jì)，分別測得OD280及OD260，然后按下式計(jì)算：蛋白含量(mg/ml)=(144×OD280-075×OD260)×稀釋倍數(shù) 

　　3.3 毒性試驗(yàn)及細(xì)菌檢查參考胸腺肽制備部分。 

應(yīng)用

【藥理作用】 本品可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖與分化，誘導(dǎo)具有細(xì)胞毒樣活力的殺傷細(xì)胞，誘導(dǎo)及增強(qiáng)殺傷性T細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的活力等。 

【臨床應(yīng)用】 適用于慢性活動性乙型肝炎病毒感染等 

【用法用量】 靜脈滴注：每次2.5萬-5萬U，每日1次。 

【不良反應(yīng)】 常見發(fā)熱、寒戰(zhàn)等反應(yīng)。1.消化系統(tǒng)：惡心、嘔吐、腹瀉、結(jié)腸局部壞死或穿孔。 2.呼吸系統(tǒng)：可致間質(zhì)性肺水腫、呼吸性堿中毒。3.神經(jīng)系統(tǒng)：可發(fā)生行為變化、認(rèn)知障礙。4.心血管系統(tǒng)：可出現(xiàn)低血壓、心動過速、心律失常等癥狀。5.血液系統(tǒng)：可出現(xiàn)中性粒細(xì)胞上升，淋巴及單核細(xì)胞下降。6.泌尿系統(tǒng)：出現(xiàn)少尿、體液潴留、氨質(zhì)血癥?？沙霈F(xiàn)內(nèi)分泌功能紊亂，血鈣、血磷下降，維生素C缺乏。 

【規(guī)格】 粉針劑:1000u,10000u, 10萬u, 100萬u. 

注意事項(xiàng)：癲癇、嚴(yán)重低血壓，心、腎功能不全，高熱者禁用。孕婦、患有心臟病或肺部疾病、60歲以上者慎用。用藥期間應(yīng)定期查肝、腎功能。

Th1細(xì)胞,Th2細(xì)胞

白細(xì)胞介素-6,10,12,13