貼壁細(xì)胞樣品如何制備的問題
發(fā)布時間：2014/2/8 9:02:19 瀏覽次數(shù)：3553 [字號：大 中 小] [關(guān)閉此頁 打印此頁]
因為在你們這里HK,G6PD,LDH,GSH,PK的酶活性檢測試劑盒，想了解一下關(guān)于貼壁細(xì)胞樣品如何制備的問題，和我們這里只有1.0cm光徑的比色皿，用1.0和0.5的區(qū)別在哪里。下面是我的蛋白樣品制備的方法，看是不是需要改進(jìn)，謝謝。
回復(fù):
體外培養(yǎng)細(xì)胞用超聲裂解后用于相關(guān)酶活性檢測，是可以的！從您需要檢測的指標(biāo)中，HK、PK、LDH、GSH測定細(xì)胞內(nèi)我們都做過，沒有問題。
操作流程：貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，去掉培養(yǎng)液后，PBS洗1-2次，胰酶消化，終止后用移液器輕輕吸打，然后轉(zhuǎn)入EP管，低速離心棄上清，再用PBS洗一次細(xì)胞，離心棄上清留沉淀細(xì)胞，如果暫時不做，將沉淀細(xì)胞低溫凍存！
測定之前，根據(jù)指標(biāo)，加入一定量的緩沖液（PBS或者生理鹽水），將細(xì)胞懸浮，超聲破碎，破碎后不需離心，直接混勻充分后用于不同指標(biāo)的測定。但是細(xì)胞一旦破碎，相關(guān)指標(biāo)盡快完成，不可存放！
HK、PK我們是用0.5cm光徑石英比色皿進(jìn)行測定的，由于我們的反應(yīng)體系只有1ml多一點，普通1cm光徑的比色皿不夠比色！
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