細(xì)胞做AKP怎么處理？
發(fā)布時(shí)間：2014/2/8 9:25:33 瀏覽次數(shù)：4031 [字號(hào)：大 中 小] [關(guān)閉此頁(yè) 打印此頁(yè)]
購(gòu)買了貴單位的AKP活性檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)是JC-A0059.
我打算檢測(cè)96孔板貼壁細(xì)胞中不同藥物處理后AKP活性的變化，看了一下說明書，有些地方不明白：
1.細(xì)胞裂解液用的是什么：說明書舉例用的是“0.2毫升的1%Trition加入12孔板",但不知道要處理細(xì)胞多長(zhǎng)時(shí)間呢？96孔板大概需要加多少呢？
2.舉例中提到要用BCA法測(cè)定蛋白濃度，我不太清楚，做貼壁細(xì)胞AKP活性檢測(cè)都需要檢測(cè)蛋白濃度嗎？
這里的蛋白濃度是用Triton裂解細(xì)胞后獲得的蛋白裂解液檢測(cè)的嗎？是否每個(gè)孔都需要檢測(cè)蛋白？
懇請(qǐng)盡快解答，謝謝！！我的聯(lián)系電話是13798040097 杜宇
回復(fù)：
1、用TritonX-100裂解細(xì)胞，測(cè)定AKP活性，我們建議4℃裂解，但是一般所需時(shí)間會(huì)比較長(zhǎng)，至少需要2小時(shí)左右，但很多老師提到時(shí)間不夠，需要4℃裂解過夜?。P(guān)于細(xì)胞破碎的程度，最好用顯微鏡觀察確定）
96孔板容量較少，裂解液只需要覆蓋滿細(xì)胞就可以了，所以96孔板加30-50微升就可以了！
2、測(cè)定細(xì)胞的AKP活性，需要破碎細(xì)胞，考慮到每一孔的細(xì)胞量的差異，所以破碎細(xì)胞后我們都會(huì)同時(shí)檢測(cè)其中的總蛋白濃度！用于結(jié)果計(jì)算并校正細(xì)胞數(shù)量的差異！也就是用TritonX-100裂解細(xì)胞后一部分用于AKP的測(cè)定；一部分用于總蛋白的定量！
當(dāng)然也有老師不考慮細(xì)胞量的問題，直接按孔來表示并比較結(jié)果，不測(cè)定蛋白！
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