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小鼠腦組織勻漿測定SOD、羥自由基的問題？

發(fā)布時(shí)間：2014/2/8 10:04:48　瀏覽次數(shù)：9436　[字號(hào)：大 中 小]　 [關(guān)閉此頁　打印此頁]

我采用的是連續(xù)波長的酶標(biāo)儀

1. 測SOD用的是1%的小鼠腦組織勻漿100ul進(jìn)行測定的，波長按說明書的550nm，加200ul到96孔板測定的，預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)用了60、80、100ul三個(gè)劑量，也都是測到負(fù)值，把負(fù)值變正后，100ul的百分抑制率在15-55%之間。所以都用了100ul的。我測的對照管OD 0.19，而測定管OD都比這個(gè)值大。

2.羥自由基測定時(shí)因?yàn)樵噭┝坑邢蓿凑諑熜种白龅慕?jīng)驗(yàn)，也是取的1%的小鼠腦組織勻漿。測的標(biāo)準(zhǔn)空白管OD 0.30左右，標(biāo)準(zhǔn)管OD 0.53左右，請問和貴公司以往結(jié)果是否相符，另外能否給我一個(gè)對照管的OD，因?yàn)楫?dāng)時(shí)試劑污染了，沒有測到。

3.考馬法測蛋白也是取的1%的組織勻漿，還稀釋標(biāo)準(zhǔn)品后做了標(biāo)準(zhǔn)曲線的，空白是0.212，0.563g/L標(biāo)準(zhǔn)液0.27，出現(xiàn)負(fù)值的OD值介于0.16-0.20.酶標(biāo)儀取的波長是595nm，我將樣本、標(biāo)準(zhǔn)及試劑均減半量，最后96孔板也是取的200ul。膽堿酯酶也是取的1%組織勻漿，測定OD值在0.30左右，對照管OD值小于這個(gè)值。酶標(biāo)儀選擇波長520nm，取樣量也都減半，最后96孔板都取200ul。

回復(fù)：

查我們檢測記錄，羥自由基對照管一般吸光度在0.7-0.8！1cm光徑測定，標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)空白的差值一般在0.4多，老師用200微升上96孔板，比色光徑在0.5cm左右，所以您的差值在0.2多還是可以的！SOD和考馬可以放到一起考慮，查我們檢測記錄，1%腦組織勻漿，蛋白濃度一般在0.3-0.4g/L左右，同時(shí)SOD則取50微升左右測定；但是現(xiàn)在老師的情況是，用1%的勻漿，蛋白濃度還有部分是負(fù)值，測定不出，那說明樣本中總蛋白濃度也偏低，相應(yīng)的其中SOD活性肯定也會(huì)降低！這種情況下，SOD和蛋白濃度測定，都需要加大濃度來進(jìn)行檢測！（順便問下，老師測定所用的勻漿上清是當(dāng)天制備的還是保存的？）CHE測定，用1%勻漿濃度太低了，老師應(yīng)該用10%勻漿測定一下！ 

CAT和LDH能測定什么樣本？

大鼠骨骼肌和腦組織線粒體做指標(biāo)的濃度和取樣量問題？