壁細(xì)胞中ATP含量測(cè)定的一些問題？
發(fā)布時(shí)間：2014/2/10 15:37:14 瀏覽次數(shù)：4703 [字號(hào)：大 中 小] [關(guān)閉此頁 打印此頁]
想要測(cè)定貼壁細(xì)胞中ATP含量。想和您請(qǐng)教一些問題：
1、說明書中”先離心處理將細(xì)胞核培養(yǎng)上清分離“，意思是用胰酶將細(xì)胞從貼壁變成懸浮，在離心與培養(yǎng)上清分離嗎？但是胰酶會(huì)不會(huì)對(duì)細(xì)胞有影響呢？有更好的辦法嗎？
2、說明書上說，將細(xì)胞置于熱水浴90-100中勻漿破碎，請(qǐng)問勻漿破碎具體怎么操作呢？
3、混勻抽提后，待測(cè)樣品應(yīng)置于哪里？冰上還是室溫？
4、一般熱水浴和沸水浴如何做到的，目前實(shí)驗(yàn)室里沒有加熱到這么高溫度的恒溫水浴鍋，不知道有沒有其他辦法？
5、是經(jīng)過說明書上的樣品前處理，之后再進(jìn)行蛋白濃度的測(cè)定嗎？gprot/L這個(gè)蛋白濃度的單位是怎么定義的？
回復(fù)：1、一般的處理方法是用胰酶消化，再離心分離，再用生理鹽水洗2-3次，離心留沉淀。
2、可以用超聲細(xì)胞破碎儀或者玻璃勻漿管旋轉(zhuǎn)碾磨破碎。
3、室溫
4、把水煮開用就好
5、對(duì)。gprot/L表示克蛋白/L，即1L樣本中有蛋白多少g
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