BCA測出結(jié)果是考馬的2倍
發(fā)布時間：2014/6/5 8:32:31 瀏覽次數(shù)：7129 [字號：大 中 小] [關(guān)閉此頁 打印此頁]
樣品為單胞藻，是浮游植物,同樣的樣品采用不同蛋白定量方法進(jìn)行測定。結(jié)果表明，BCA方法獲得的蛋白含量是考馬斯亮藍(lán)法得到的兩倍，為什么會有兩倍差距，問題出在哪里？哪個為準(zhǔn)呢？
蛋白質(zhì)測定的方法有諸多種，目前針對組織樣本采用的比較普遍的方法時考馬斯亮藍(lán)蛋白定量和BCA蛋白定量居多，但是蛋白測定無論是哪一種方法都會有一定的局限性；考馬斯亮藍(lán)通過主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結(jié)合，進(jìn)行蛋白定量，非堿性氨基酸部分就會被忽略，如此測定結(jié)果有可能測定結(jié)果比真實(shí)結(jié)果偏低；而BCA蛋白定量試劑盒通過測被蛋白質(zhì)易氧化成分（巰基，酚基）還原的一價銅離子，而間接得出蛋白質(zhì)量。蛋白質(zhì)中可能含有其它雜質(zhì)，且是易氧化成分，則可能BCA測量結(jié)果大于真實(shí)值。再加之BCA方法靈敏度也偏高，所測結(jié)果有可能會比考馬斯亮藍(lán)方法測得結(jié)果偏高情況。另外就是您測出的OD值過于偏高，高出試劑盒檢測限，需要進(jìn)行稀釋后再測定效果會比較好。
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