

細(xì)胞上清測定LDH問題
發(fā)布時間:2014/6/5 8:32:54 瀏覽次數(shù):9250 [字號:大 中 小] [關(guān)閉此頁 打印此頁]
測的是小鼠肝癌細(xì)胞培養(yǎng)上清的LDH,實驗設(shè)計時設(shè)了LDH最大釋放孔(在細(xì)胞上清對比加入2%Triton)和自然釋放孔(細(xì)胞上清對比加入空培養(yǎng)基)。最大釋放孔LDH測定值比自然釋放孔還低,不明白原因。
tritonX100是一種表面活性劑。具有疏水端和親水端,它可以將膜蛋白從細(xì)胞膜上解離下來,從而達(dá)到提取膜蛋白的目的,但是其沒有維持酶活的作用。過量的tritonX100反而會破壞蛋白的表面親水層而破壞蛋白結(jié)構(gòu),降低酶活。Triton X-100可以提高真核細(xì)胞細(xì)胞膜的通透性,但時常使用含 0.1%-0.5%Triton X-100的PBS或TBS。老師采用的濃度是否過高,導(dǎo)致酶活力喪失原因。
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